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在微生物學(xué)、細胞生物學(xué)、生物制藥及食品工業(yè)等領(lǐng)域,培養(yǎng)基的制備與滅菌是實驗和生產(chǎn)的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)。除菌主要目的在于去除培養(yǎng)基中本身攜帶或配制過程中引入的各類雜菌(如細菌、真菌)及其孢子。培養(yǎng)基富含營養(yǎng),本身就是微生物生長的溫床,不進行除菌處理會使實驗體系污染、結(jié)果失真、浪費試驗資源和時間。因此,嚴(yán)格的除菌是確保實驗純凈性、結(jié)果可靠性及可重復(fù)性的根本前提。
常見的除菌方法主要有三種:熱力滅菌、輻照滅菌、過濾除菌。熱力滅菌包括有121℃高溫高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌,但是熱力滅菌可能導(dǎo)致熱敏成分降解、糖類焦化、pH值改變和沉淀形成,許多培養(yǎng)基成分(如生長因子、維生素、抗生素、某些糖類和氨基酸)對熱敏感,高溫滅菌會導(dǎo)致其活性喪失或化學(xué)結(jié)構(gòu)改變。輻照滅菌使用γ射線滅菌,但一般用于大規(guī)模的商業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基預(yù)滅菌,場地要求和設(shè)備成本都非常高,研發(fā)、科研類實驗室用戶,或一般小試中試無法承擔(dān)。
而過濾除菌作為一種關(guān)鍵的物理除菌技術(shù),通過機械截留方式去除培養(yǎng)基中的微生物,同時盡可能保持培養(yǎng)基成分的生物活性和化學(xué)完整性。通過特定孔徑的過濾介質(zhì)(一般使用過濾膜),物理性截留培養(yǎng)基中微生物,包括細菌、真菌及其孢子等,使其達到無菌狀態(tài)的技術(shù)過程。與熱滅菌、化學(xué)滅菌等方法相比,過濾除菌不依賴高溫、輻射或化學(xué)試劑,從而避免了熱敏性成分的降解和化學(xué)污染的風(fēng)險。此外除菌過濾裝置和過濾膜成本較低,臺面占用空間小,可以直接在超凈工作臺和生物安全柜內(nèi)的臺面內(nèi)使用,適合各類客戶使用。
在日常過濾時,通常采用0.22μm濾膜以截留絕大多數(shù)細菌和真菌,而對更小的微生物如支原體,則需使用0.1μm孔徑濾膜。其除菌機制不僅依賴于直接的篩分效應(yīng)(截留大于孔徑的顆粒),還通過濾材的靜電吸附或疏水相互作用捕獲更小的顆粒,并可能因顆粒在孔口的堆積形成“架橋"效應(yīng),從而增強整體截留效率,從而達到除菌目的。
使用濾膜來過濾培養(yǎng)基達到除菌效果,還有以下優(yōu)勢:
首先,生物相容性優(yōu)勢。濾膜法在常溫下操作,避免熱敏成分(如生長因子、維生素、某些抗生素)的降解。研究表明,經(jīng)0.22μm濾膜過濾的含血清培養(yǎng)基,其細胞生長促進活性比高壓滅菌樣品高15-30%。不引入化學(xué)滅菌劑,無殘留毒性風(fēng)險。對于pH敏感的培養(yǎng)基,過濾不會改變其酸堿平衡。
其次,操作與控制優(yōu)勢。現(xiàn)代過濾裝置配備實時監(jiān)測系統(tǒng),可精確控制壓力、流量和溫度,確保批次間一致性。完整性測試提供客觀的質(zhì)量保證,這是其他方法難以實現(xiàn)的。可根據(jù)不同培養(yǎng)基特性(粘度、顆粒含量、化學(xué)成分)選擇不同材質(zhì)和孔徑的濾膜。模塊化設(shè)計允許從小規(guī)模研發(fā)到大規(guī)模生產(chǎn)的線性放大。
再次,經(jīng)濟性與效率。對于常規(guī)液體培養(yǎng)基,過濾除菌通常比高壓滅菌更快(特別是冷卻時間節(jié)省)。連續(xù)過濾系統(tǒng)可實現(xiàn)自動化操作,減少人工干預(yù)。雖然初期需要購買設(shè)備,但長期來看,減少培養(yǎng)基成分降解帶來的重復(fù)實驗,降低熱滅菌的能源消耗,延長熱敏感試劑的使用壽命,減少因滅菌效果不佳導(dǎo)致的實驗失敗。
最后,安全性與合規(guī)性。封閉式過濾系統(tǒng)減少操作者暴露風(fēng)險,特別適用于病原微生物培養(yǎng)基的制備。滿足FDA、EMA、cGMP等監(jiān)管要求,完整性測試提供可追溯的文檔證據(jù)。在生物制藥行業(yè),除菌過濾是終端滅菌不可行時的優(yōu)選方法。

要完成除菌過濾,雖然主要依靠過濾膜,但仍需要一整套的設(shè)備來協(xié)助完成,比如L100FS小型一體臺式培養(yǎng)基除菌真空抽濾系統(tǒng),其采用一體式結(jié)構(gòu),將除菌過濾所需要的抽濾泵、集液瓶、濾液、防倒吸保護器等部件集合在一臺機體內(nèi),主要包括以下組成部分:
1.負壓抽濾泵——提供負壓吸引力,可以加快培養(yǎng)基通過濾膜的速度,加快整個過濾過程。
2.瓶頂過濾器——這是一種可以直接和藍蓋試劑瓶連接的濾器,包含兩部分,過濾基座和過濾杯。過濾基座起到承上啟下的作用,上面和濾杯連接,下面有可以和試劑瓶連接的GL45標(biāo)準(zhǔn)螺紋,同時中間帶有支撐濾膜的濾膜支撐片。
3.藍蓋試劑瓶——用于接收通過濾膜的培養(yǎng)基。使用試劑瓶接收濾液,而不是特殊的三角錐形瓶或真空集液瓶,這樣即可以在過濾完成后,取下過濾器,擰上試劑瓶蓋,便于保存。
4.泵管——用于連接抽濾泵主機和過濾器,是抽吸氣體的通路。
5.阻水保護器——安裝在抽濾泵的抽汽口處,可以有效防止濾液倒吸抽入泵內(nèi),造成的進水故障。